El durazno [Prunus persica (L.) Batsch] es uno de los principales frutales de hueso que se cultivan en las diferentes regiones del mundo (Salmasi et al. 2023). Su importancia radica en sus múltiples usos industriales, desde el envasado hasta la extracción de compuestos bioactivos (Cisneros et al. 2021, Siddiqui et al. 2023). A nivel mundial, México se sitúa en la posición número 17 en producción, contribuyendo con el 0.6% de la producción mundial. En el año 2021, los estados de Zacatecas, Chihuahua, Puebla, y Estado de México fueron los principales productores, aportando conjuntamente el 75.5% de la producción nacional (SIAP 2022). Sin embargo, este frutal se ve afectado por diferentes enfermedades causadas por agentes bióticos, las cuales provocan la disminución del rendimiento y calidad de la fruta, así como la longevidad del cultivo (Abarca et al. 2017). Las principales enfermedades provocadas por hongos fitopatógenos en este cultivo son: podredumbre parda (Monilia spp.), gomosis (Botrysphaeria spp.), costra del durazno (Cladosporium carpophilum), cancro constrictivo (Phomosis amygdali), oídio (Sphaeroteca panosa), verrucosis (Taphrina deformans), tiro de munición (Coryneum beijerinckii), roya (Tranzschelia discolor) y podredumbre de la raíz y corona (Phytophthora spp.) (INIFAP 2005, Luo et al. 2022).

En las huertas comerciales de durazno, ecotipo Diamante, en Los Caracoles, Valparaíso, Zacatecas, se ha presentado una enfermedad que afecta a los árboles, el principal síntoma es necrosis descendente en las ramas, conocida por los productores como secadera. Actualmente se desconocen los agentes causales de esta enfermedad, por lo que se dificulta su prevención y control. El objetivo de la investigación fue identificar los hongos asociados a la necrosis descendente en ramas del duraznero, así como el posible agente causal de la enfermedad.

Las muestras de ramas y raíces fueron obtenidas de una parcela de duraznero de 10 años de producción del ecotipo Diamante, en la comunidad Los Caracoles, Valparaíso, Zacatecas. La huerta está ubicada a una altitud de 2170 msnm, entre las coordenadas 23° 04´ 16´´LN y 103°29´48´´ LO. Se utilizó la técnica de muestreo dirigido en zig-zag en árboles con síntomas de la enfermedad, el muestreo se realizó en ocho árboles, de cada árbol se obtuvieron 5 submuestras, dando un total de 40 ramas y raíces. El aislamiento consistió en cortar tejido vegetal enfermo, realizando pequeños cortes (0.5 a 1 cm) de la zona de avance de la infección, donde el patógeno estaba en activo desarrollo. Los segmentos se desinfectaron con una solución de hipoclorito al 1% durante 3 min, se enjuagaron dos veces con agua destilada estéril por 1 min y se colocaron en papel secante estéril. Posteriormente se sembraron en medio de cultivo papa-dextrosa-agar (PDA) y se incubaron a 26 ± 2 °C por 3 días. Se aplicó la técnica de punta de hifa descrita por Rodríguez y Vargas (2022) para purificar los hongos. Esta punta se colocó en medio de cultivo PDA e incubó a 26 ± 2 °C durante el tiempo que tardó en desarrollar las estructuras necesarias para su identificación.

Para la identificación morfológica se realizaron montas de las estructuras con lactofenol, posteriormente se utilizó un microscopio compuesto utilizando los objetivos 10x y 40x, se apoyó con las claves taxonómicas de Barnett y Hunter (1998), Leslie y Summerell (2006), y Simmons (2007), para poder identificar a nivel de género. En la identificación morfométrica se utilizó un microscopio compuesto con cámara portátil (AM4023X) y el software de medición DinoCapture 2.0.

La identificación a nivel molecular de cada cepa (Alternaria sp., Fusarium sp.1 y Fusarium sp.2) se realizó en el Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica A.C. (IPICYT). Se enviaron las cepas por duplicado y la identificación se llevó a cabo a través de la secuenciación de la región ITS1 e ITS2, usando secuenciadores automatizados (3500 y 3130 Series Genetic Analyzer, Applied Biosystems). Las muestras fueron secuenciadas con el método de didesoxinucleótidos, utilizando cultivos monospóricos para la extracción de ADN. Para amplificar la región ITS1 e ITS2 se utilizó la técnica PCR punto final (Termociclador Verity, Applied Biosystems) (Jahén et al. 2020), y los primers universales ITS1 (5´-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3´) e ITS4 (5´-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3´). La identificación a nivel de género y especie se llevó a cabo a través del análisis BLAST (Basic Local Alignment Search Tool), comparando las secuencias obtenidas con las secuencias reportadas en la base de datos del GenBack del National Center for Biotechnology Information (NCBI), EUA.

Se realizaron pruebas de patogenicidad in vivo en árboles de durazno de 7 meses de edad, del ecotipo Diamante sobre patrón criollo, con el fin de verificar que los hongos aislados fueran los agentes causales de la necrosis descendente del duraznero, aplicando los postulados de Koch (Robledo-D’Angelo 2016). Se evaluaron 6 tratamientos de hongos aislados y un testigo: T1= Alternaria sp., T2= Fusarium sp. 1, T3= Fusarium sp. 2, T4= Alternaria sp. + Fusarium sp.1, T5 = Alternaria sp. + Fusarium sp. 2, T6= Alternaria sp. + Fusarium sp. 1+ Fusarium sp. 2, y T7= Testigo (sin inocular). La inoculación con Alternaria sp., se realizó de acuerdo con la técnica descrita por Bolboli et al. (2022), con ligeras modificaciones. Brevemente, se desinfectaron las ramas con etanol 70%, después se realizó una herida con un bisturí para levantar la corteza y colocar un explante (2.5 mm de diámetro), obtenido de un cultivo del hongo de 17 días de crecimiento, se cubrió el explante con la corteza y se selló con parafilm. Para el testigo se colocó un explante de medio PDA del mismo tamaño. Se inocularon 3 ramas por árbol.

Para la inoculación con Fusarium sp. 1 y sp. 2, se utilizó la metodología descrita por Ángel-García et al. (2018), con algunas modificaciones. Brevemente, se preparó una suspensión de esporas a una concentración de 1x10⁶ conidios mL^-1. A las raíces de los árboles se les realizó una pequeña herida con un bisturí, en donde se les aplicaron con una jeringa 5 mL de la suspensión de esporas por herida. Se realizaron observaciones de los síntomas desarrollados, cada 15 días hasta los 60 días y se procedió a hacer un nuevo aislamiento de los hongos para corroborar la presencia de los hongos aislados del duraznero (cuarto postulado de Koch) (Robledo-D’Angelo 2016).

En las cepas aisladas de las ramas del duraznero, se identificó un hongo de género Alternaria sp. Estas cepas se desarrollaron en un promedio de 15 días, presentaron una apariencia algodonosa, con una coloración inicial blanca grisácea, posteriormente se observó una superficie de tono café oscuro en el centro y con bordes grises (Figura 1A). Se observaron conidios obclavados, muriformes, con ornamentación rugosa-punteada, con septación longitudinal variable de 3 a 4 y tamaño de conidios entre 15.35 y 27.44 μm de largo y entre 11.24 a 13.84 μm de ancho (Figura 1D). Respecto a las muestras de raíz, se obtuvieron cepas que corresponden a dos especies del género Fusarium. La cepa de Fusarium sp. 1, se desarrolló en un promedio de 14 días, y presentó un micelio velloso de color blanco, el cual se tornó púrpura después de 10 días de incubación (Figura 1B). Sus macroconidios mostraron una longitud aproximada de 28.97 µm, mientras que el ancho fluctuó entre 4.75 a 5.12 µm, con formas semicurva y recta a ligeramente semicurva. Se observaron células apicales con forma curvada y ligeramente curvada, mientras que las células basales se observaron ligeramente alargadas en forma de pie (Figura 1E). Por otra parte, la cepa de Fusarium sp. 2, se desarrolló en un promedio de 10 días, presentó micelio plano de color blanco (Figura 1C). Presentó macroconidios de una longitud entre 10.51 a 31.32 µm, mientras que el ancho fluctuó entre 3.92 a 5.15 µm, con formas semicurva y recta a ligeramente semicurva. Se observaron células apicales con forma curvada y ligeramente curvada, mientras que las células basales se mostraban ligeramente alargadas en forma de pie, los macroconidios de esta especie presentaron 3 septos (Figura 1F).

Figura 1

De acuerdo con los resultados de BLAST del NCBI, las secuencias obtenidas presentaron altas similitudes con las regiones ITS del ADN ribosómico, de hongos reportados en el GenBank. La alineación de la cepa de Alternaria sp. mostró una identidad del 99% a A. tenuissima, con una secuencia específica en la base de datos con No. de acceso OM884060.1, observando 1 gap en una longitud de 520 pares de bases (pb). Por otra parte, las cepas de Fusarium spp. mostraron identidades del 99% a F. oxysporum (Fusarium sp. 1), y F. solani (Fusarium sp. 2), con secuencias específicas en la base de datos con No. de acceso ON597617.1 y OP750381.1, respectivamente. La secuencia de F. oxysporum tuvo 2 gaps en una longitud de 554 pb, mientras que en F. solani se observaron 0 gaps en una longitud de 526 pb. Alternaria tenuissima es una especie importante ya que puede causar grandes pérdidas económicas en los cultivos. En postcosecha, ocasiona podredumbre seca del interior de la manzana (Malus domestica) (Rozo et al. 2019), en ciruela japonesa (Prunus salicina L.) provoca pudrición del fruto (Riquelme et al. 2021), en el cultivo de cerezo genera la pudrición negra (Cancino et al. 2023). Por otra parte, el hongo Fusarium spp. es un patógeno considerado como componente natural de la rizósfera de las plantas, pero, existen cepas que pueden llegar a ocasionar pérdidas económicas en los cultivos (Ceballos et al. 2023). Al respecto, Rodríguez y Hernández (2004), mencionan que F. oxysporum y F. solani son las especies más predominantes que ocasionan lesiones del tallo y raíz, en plántulas de durazno. También, se ha reportado que estos patógenos provocan la pudrición de la raíz y de la corona en los cultivos de manzano en Irán (Esmaili y Sharifnabi 2023). Por otra parte, Astapchuk et al. (2020), mencionan que el 35% de los aislados de hongos en cultivos de manzano con síntomas de pudrición de raíz, pertenecen a F. oxysporum. En postcosecha, F. solani provoca la pudrición del fruto en duraznos (Zhu et al. 2019).

Respecto a las pruebas de patogenicidad, se observó a los 14 días después de la inoculación (DDI) con A. tenuissima (T1, T4, T5 y T6), la presencia de manchas foliares color marrón con halo amarillo, las cuales se intensificaron a los 60 DDI (Figura 2C). En las ramas se observó a los 30 DDI necrosis en el ápice, y posteriormente la caída de hojas (Figura 2D). Al repecto, Li et al. (2019), reportaron manchas foliares en las hojas del árbol de kiwi, identificando a A. tenuissima como el agente causal. Asimismo, González-Diaz et al. (2011) observaron necrosis en las ramas de los árboles de Salix bonplandina inoculadas con A. tenuissima, características similares a las presentadas en este estudio. De las ramas con necrosis de los árboles inoculados (Figura 2D), a los 60 DDI, se realizó el aislamiento del hongo, el cual presentó las mismas características morfológicas de A. tenuissima (Figura 2E) cumpliendo con el cuarto postulado de Koch (Robledo-D’Angelo 2016).

Figura 2

Por otra parte, los árboles inoculados con las especies de Fusarium (T2 y T3) a los 60 DDI, no presentaron sintomatología de la enfermedad (Figura 2B), sus hojas y ramas permanecieron verdes al igual que el testigo (Figura 2A). Estos resultados coinciden con lo reportado por Pinargote et al. (2020), quienes mencionan que en las plántulas de Tectona grandis L.f., inoculadas con Fusarium spp., no se observó la presencia de decoloración, marchitez o pérdida de turgencia, que son los síntomas característicos de este hongo. Este efecto podría ser atribuido a que F. oxysporum y F. solani, se encontrarían como saprófitos en las raíces de los durazneros. Mientras que Соколова (2019), menciona que la mayoría de los hongos de las especies de Fusarium son saprófitos del suelo y viven en restos de plantas muertas, en la rizósfera de las plantas y en la superficie de las raíces. Los resultados anteriores muestran que A. tenuissima, F. oxysporum y F. solani se encuentran asociados a la necrosis descendente en las ramas del duraznero. Además, se evidenció que A. tenuissima podría ser el agente causal de esta enfermedad. Por otra parte, los hongos F. oxysporum y F. solani se encuentran asociados en las raíces de los árboles, como hongos saprófitos del suelo y no intervienen directamente en los síntomas de la enfermedad.

Se concluye que, en los durazneros enfermos del ecotipo Diamante en la comunidad de Los Caracoles, Valparaíso, Zacatecas, México, se aislaron e identificaron los hongos: Alternaria tenuissima, Fusarium oxysporum y F. solani, asociados a la necrosis descendente en las ramas. Además, se evidenció que A. tenuissima podría ser el agente causal de la enfermedad. Este es el primer reporte de la presencia de estos tres hongos asociados a la necrosis, así como del posible agente causal.